惊厥持续状态幼年大鼠海马中葡萄糖调节蛋白78与半胱氨酸门冬氨酸特异性蛋白酶12的表达及依达拉奉对其影响

摘要

目的观察幼年大鼠惊厥持续状态（status convulsion,SC）后脑组织海马中内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78（glucose regulated protein,GRP78）、半胱氨酸门冬氨酸特异性蛋白酶12（Caspase-12）的表达及神经细胞凋亡的变化,并探讨依达拉奉（edaravone,ED）对三者的影响。方法将195只SD幼年雄性大鼠随机分为生理盐水对照组（NS组）、惊厥持续状态组（SC组）和依达拉奉预处理组（ED组）,每组65只,各组均按SC后处死时间点分为4、12、24、48、72 h五个亚组,每组13只。采用氯化锂-匹鲁卡品化学点燃法制备幼年大鼠SC模型。应用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）法检测GRP78 mRNA和Caspase-12 mRNA的表达,免疫组化法检测大鼠海马中GRP78和Caspase-12蛋白表达情况,TUNEL法检测神经细胞凋亡数的变化。结果 （1）免疫组化结果显示SC组幼年大鼠海马中GRP78（12 h组0.1480±0.0164,24 h组0.1682±0.0114,48 h组0.1540±0.0102）和Caspase-12（12 h组0.1325±0.0165,24 h组0.1794±0.0213,48 h组0.1525±0.0423,72 h组0.1309±0.0199）表达增强,与NS组（GRP78:12 h组0.1214±0.0147,24 h组0.1272±0.0177,48 h组0.1260±0.0157;Caspase-12:12 h组0.1050±0.0121,24 h组0.1041±0.0151,48 h组0.1058±0.0222,72 h组0.1036±0.0186）比较差异有统计学意义（P＜0.01或＜0.05）;与SC组比较,ED组GRP78（12 h组0.1550±0.0131,24 h组0.1886±0.0154,48 h组0.1721±0.0151）表达明显增强,而Caspase-12（12 h组0.1211±.0.0184,24 h组0.1545±0.0205,72 h组0.1085±0.0219）表达明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）;（2）RT-PCR法检测结果显示GRP78 mRNA和Caspase-12 mRNA表达趋势与蛋白基本相似;（3）SC组在惊厥12 h（11.41±2.37）时间点海马CA1区TUNEL阳性细胞数已显著高于NS组（P＜0.01）,48 h（28.78±5.11）达峰,而ED组TUNEL阳性细胞数在12～72 h时间点（12 h组8.98±2.22,24 h组13.09±2.54,48 h组20.57±4.89）均较SC组显著下降（P＜0.01或P＜0.05）,但仍高于NS组（12 h组6.22±1.50,24 h组6.57±1.61,48 h组6.72±1.14）（P＜0.01或P＜0.05）,在4 h时间点三组（NS组6.29±1.49,SC组6.61±1.71,ED组5.75±1.41）间TUNEL阳性细胞数差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 SC后大鼠海马GRP78和Caspase-12的表达增强,ED可上调匹鲁卡品致（?）大鼠海马GRP78和下调Caspase-12的表达,并使神经细胞凋亡数减少;提示ED对SC引起的脑损伤可能有保护作用。