神经母细胞瘤SK-N-SH细胞在氯化钴模拟缺氧后侧群细胞基因表达谱的变化

摘要

目的探讨SK-N-SH神经母细胞瘤株在氯化钴模拟缺氧条件下侧群（side population,SP）细胞比例的变化及SP细胞基因表达谱的改变。方法采用二氯化钴模拟缺氧条件,然后利用Hoechst 33342染料法,通过流式细胞仪紫外激光检测分选功能分选出缺氧及常氧SK-N-SH细胞中的SP细胞,利用Agilent 8×60K人（Human）G3表达谱芯片进行检测,并对基因芯片结果进行分析,以荧光定量PCR验证芯片结果。结果 SK-N-SH细胞株的SP细胞比例约为8.65%,缺氧后降至约2.08%;缺氧SP细胞和常氧SP细胞mRNA及lincRNA的表达谱存在明显差异。差异＞2倍的基因有5077 mRNA、1383 lincRNA、其中上调的有2550 mRNA、572 lincRNA,下调的有2527 mRNA、811 lincRNA。差异表达的基因主要涉及细胞周期、DNA复制、p53及MAPK信号通路等生物学过程。荧光定量PCR基因结果与芯片差异基因结果表达趋势一致。结论缺氧使SP细胞比例下降,并使SP细胞mRNA和lincRNA的表达谱均发生显著改变,提示mRNA和lincRNA共同参与调节神经母细胞瘤SP细胞在缺氧环境中的生物学行为。