miR-203靶定CAMTA1基因调控神经母细胞瘤细胞的迁移能力

摘要

目的本研究旨在探讨miR-203在神经母细胞瘤组织中的表达水平及其在神经母细胞瘤细胞迁移过程中的作用机制。方法在神经母细胞瘤细胞中转染miR-203抑制剂,通过Transwell迁移实验研究其对迁移的影响。利用生物信息学技术预测miR-203的靶基因,并应用荧光报告基因检测、实时荧光定量PCR及Western Blot对靶基因进行验证。采用siRNA干扰技术抑制靶基因CAMTA1的表达,共转染miR-203抑制剂及CAMTA1siRNA,验证miR-203是否是通过靶基因影响细胞迁移。最后应用荧光定量PCR方法检测原发性和转移性神经母细胞瘤样本中miR-203的表达。结果神经母细胞瘤细胞系SH-SY-5Y和SK-N-SH中抑制miR-203表达后,与转染miR抑制剂对照相比,细胞迁移数目分别降低了41.34%和37.86%（P＜0.05）。miR-203能够直接靶向结合CAMTA1 mRNA的野生型3UTR,转染miR-203抑制剂后,SH-SY-5Y和SK-N-SH细胞中内源性CAMTA1蛋白表达分别是转染miR阴性对照的2.13和1.78倍。（P＜0.05）。转染过表达CAMTA1质粒,SH-SY-5Y和SK-N-SH细胞迁移数目分别下降了25.27%和19.48%（P＜0.05）。在SH-SY5Y细胞中,同时共转miR-203抑制剂和CAMTA1 siRNA,与单纯转染miR-203抑制剂相比,细胞迁移能力增高了19.37%和（P＜0.05）,与单纯转染抑制剂对照组相比,无统计学差异（P＜0.05）。与原发性神经母细胞瘤相比,在转移性神经母细胞瘤中,miR-203表达水平更高（P＜0.05）。结论 miR-203与神经母细胞瘤样转移性相关,并且能够通过靶定CAMTA1基因影响神经母细胞瘤细胞的迁移能力。