先天性巨结肠患儿肠神经干细胞培养的实验研究

摘要

目的探索从人类先天性巨结肠患儿的扩张段肠管提取肠神经干细胞的可行性,为进一步开展先天性巨结肠的神经干细胞自体移植治疗研究提供依据。方法利用1例先天性巨结肠手术切除的扩张段肠管,进行酶消化后,制成单细胞悬液,经体外培养形成神经球,并通过CCK8法检测肠神经干细胞在24 h、48 h、72 h、96 h、120 h和144h六个时间点的OD值,绘制生长曲线,记录增殖情况,通过Nestin、GFAP和TUJ-1细胞免疫荧光化学染色对肠神经干细胞及其分化而来的神经元和神经胶质细胞进行鉴定。结果来自扩张段肠管的单细胞悬液通过原代体外培养10 d,可见神经球形成;肠神经球随时间逐渐变大,CCK8法观察肠神经干细胞的OD值随时间而逐渐增高;形成的神经球可以继续传代,经细胞免疫荧光化学染色为Nestin染色阳性,并可分化为神经胶质细胞（GFAP染色阳性）和神经元细胞（TUJ-1染色阳性）。结论能从人类先天性巨结肠患儿的扩张段肠管提取具有自我更新能力的肠神经干细胞,可用于先天性巨结肠的神经干细胞自体移植治疗研究。