REDD1升高加重脑梗死后血管内皮细胞损伤

摘要

目的:探讨发育及DNA损伤反应调节蛋白1(REDD1)在脑梗死后血管内皮细胞损伤中的作用.方法:采用RT-qPCR和Western blot分析氧糖剥夺(OGD)诱导对人脑微血管内皮细胞(HBMECs)中REDD1表达的影响.CCK-8法分析REDD1沉默对OGD诱导的HBMECs损伤影响,采用DCFH-DA染色和肌动蛋白染色分别检测细胞内活性氧(ROS)生成和细胞骨架损伤的情况.在体内实验中,建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,分别采用REDD1小干扰RNA(si-REDD1)及其对照siRNA进行转染.在MCAO造模后3 d、7 d和14 d,对大鼠进行mNSS神经功能评分.在MCAO造模后14 d,通过TTC染色测量大鼠脑梗死体积,并采用免疫荧光双染法检测BrdU/NeuN和BrdU/vWF阳性细胞数.结果:经OGD处理后,HBMECs中REDD1的mRNA和蛋白表达上调(P<0.05).OGD处理诱导细胞骨架损伤,并抑制了细胞活力,而敲减REDD1的表达减弱了OGD的损伤作用.此外,敲减REDD1表达阻止了OGD诱导的细胞内ROS生成.MCAO大鼠神经功能损害严重,且MCAO后第14天时TTC染色显示大脑半球梗死体积显著高于假手术组(P<0.05),通过si-REDD1敲减MCAO大鼠脑组织中REDD1的表达,大鼠在MCAO后3、7和14 d的mNSS评分均显著低于MCAO组(P<0.05),且大鼠的梗死体积显著减少(P<0.05).免疫荧光染色显示,REDD1沉默组的BrdU+/NeuN+细胞数和BrdU+/vWF+细胞数较MCAO组均显著增加(P<0.05).结论:敲减REDD1表达减弱了OGD诱导的HBMECs损伤和氧化应激,并有助于增强MCAO大鼠神经发生和血管生成,促进神经功能恢复.