间歇性低氧对膀胱逼尿肌细胞凋亡的影响及益智仁调节机制

摘要

目的:观察间歇性低氧(IH)对人膀胱逼尿肌细胞凋亡和钙离子通道的影响,并初步探讨中药益智仁(AOF)的调节机制.方法:建立人膀胱逼尿肌细胞IH模型,IH模式为5％O260 min-20％O230 min,6个循环.体外培养人膀胱逼尿肌细胞,随机分为6组,每组设8孔,分别为P2X3受体拮抗剂+IH组(A组)、M3受体拮抗剂+IH组(B组)、β3受体拮抗剂+IH组(C组)、AOF+IH组(D组)、生理盐水+IH对照组(NC组)和空气模拟对照(AC)组.干预结束后普通光镜下细胞板计数比较各组细胞密度,免疫荧光法观察细胞形态改变,流式细胞术检测细胞凋亡,膜片钳法测定细胞钙离子表达变化.结果:(1)与AC组细胞比较,NC组细胞密度增高、反应活跃,部分细胞出现突起、变圆,细胞边界模糊;A组和D组细胞密度较NC组有显著减低(P<0.05);(2)免疫荧光检测细胞α-肌动蛋白(α-SMA)表达情况:与AC组比较;NC组的平均吸光度(MA)显著增高(F=3.25,P<0.05);A组、D组细胞分别与NC组比较均有不同程度显著降低(P<0.05).(3)与AC组细胞比较,NC组细胞凋亡率显著减低(P<0.05);A组与D组的细胞凋亡率分别与NC比较有显著增高(P<0.05);(4)与AC组细胞比较,NC组细胞钙离子通道表达显著减低(P<0.05);与NC组细胞比较,AOF组(100 mg/L)和AOF组(50 mg/L)钙离子通道表达显著增高(P均<0.05).结论:IH可通过P2X3膀胱神经受体调节逼尿肌细胞增殖和凋亡,中、高剂量AOF可改变钙离子通道并对IH诱导的细胞损害起保护作用.