小鼠胚胎大脑皮质活化和静息神经干细胞的初步分离与鉴定

摘要

目的:从小鼠胚胎大脑皮质中分离并鉴定静息和活化的神经干细胞.方法:通过流式细胞术,从胚胎14.5 d的小鼠大脑皮质中分选出大小不同的细胞团;利用免疫荧光技术检测神经干细胞标志物Pax6以及增殖标志物Ki67的表达变化;借助RT-qPCR分析两组细胞中干细胞标志基因Pax6、Oct4、Sox2和Nanog的表达情况;采用流式细胞术及RT-qPCR分析两组细胞所处的周期;体外培养对大、小细胞组进行增殖能力检测.结果:免疫荧光结果表明,分离出的两类细胞均表达Pax6,且大细胞组Ki67为阳性,小细胞组为阴性.细胞周期分析显示,小细胞组G0/G1期比例高于大细胞组,而G2/M期为0,且cyclin A和cyclin B的表达显著低于大细胞组(P0.05).结论:大、小细胞团分别为活化和静息的神经干细胞.活化的干细胞具有较强的增殖能力,而静息干细胞自我复制与增殖能力较差.在体外培养条件下,静息的神经干细胞可以被转激活.