逆转录病毒载体介导的反义c-myc抗白血病作用的研究

摘要

目的:研究c-myc基因在L6565小鼠白血病发生中的作用以及抑制其表达所起的治疗作用. 方法:用逆转录病毒载体pGNC构建一个含有小鼠反义c-myc基因的逆转录病毒表达系统pGNCas.用磷酸钙沉淀法将pGNCas导入包装细胞PA317,筛选获得病毒生产细胞.用pGNCas病毒感染L6565白血病克隆细胞, 筛选后,获得抗G418阳性克隆细胞L6565as.PCR方法检测反义c-myc序列是否稳定整合入L6565as细胞中.最后从细胞生长、形态、周期、软琼脂集落形成能力以及c-myc基因表达方面观察其恶性和表型的改变. 结果:L6565as细胞形态变圆,大小较一致.生长曲线显示:L6565as细胞生长被抑制;流式细胞仪检测细胞周期: L6565as阻滞于G0/G1期,S期细胞减少;软琼脂集落形成试验发现L6565as细胞形成克隆数明显减少.免疫组化检测:L6565as细胞c-myc蛋白表达呈弱阳性,而对照组细胞呈强阳性.结论:c-myc基因在L6565小鼠白血病的发生中起着重要的作用;抑制c-myc的表达,可部分逆转L6565白血病的恶性表型和恶性行为.