含绿色荧光蛋白和hytk双顺反子真核表达载体的构建及其在膀胱癌细胞中的表达*

摘要

目的:构建一种带有绿色荧光蛋白(gfp)、潮霉素磷酸转移酶和HSV-tk的融合基因cDNA(hytk)的新型真核表达载体.方法:利用脑炎心肌炎病毒(EMCV)的内部核糖体进入位点(IRES),将gfp的cDNA与hytk基因连接,构建获得含gfp和hytk基因的重组质粒;lipofectin介导下转染人膀胱癌细胞株EJ,并检测其表达情况.结果:成功地构建了含gfp和hytk基因双顺反子真核表达载体,PCR检测证实转基因细胞的gfp与hytk基因的整合,荧光显微镜下可观察到发绿色荧光的转基因细胞,MTT法测定示丙氧鸟苷(GCV)对EF/hytk-gfo细胞有明显的杀伤作用,此杀伤效应呈时间和剂量依赖性,72 h IC50值为2.16 mg/L,而对野生型的EJ细胞无明显毒性(P＜0.05).结论:含绿色荧光蛋白和hytk基因双顺反子真核表达载体的构建为hytk基因治疗恶性肿瘤用于临床提供了新的治疗工具及随访检测手段.