目的:研究人肾上腺素α2A受体基因-1296位G/C多态性对DNA与蛋白质结合的影响.方法:以重组质粒为模板,扩增-1296位为G或C的390 bp片段(-1414--1025)bp,分别与细胞核蛋白质结合,经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,与地高辛(Dig)标记的同源DNA片段杂交.另将Dig-dUTP标记的同一片段与经SDS-PAGE转印至膜上的细胞核蛋白质进行DNA-蛋白质结合反应,以抗Dig抗体检测结合反应信号.结果:EMSA结果显示,-1296位为C的片段可与细胞核蛋白质结合,X光片上显示一条特异性结合带;为G时则无;人肾上腺素α2A受体基因(-1414--1025) bp 390 bp DNA片段与细胞核提取物杂交结果显示,在约15 kU位置可见一蛋白质条带.结论:肾上腺素α2A受体基因-1414--102 5bp之间可能存在一转录因子结合位点,-1296位为C时,能与一特异性核蛋白结合,此蛋白质的相对分子量约为15 kU.
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