mmLDL对人脐静脉内皮细胞PAI-1表达的影响及其转录调控机制

摘要

目的:探讨弱氧化修饰低密度脂蛋白(mmLDL)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)PAI-1活性和mRNA表达的影响及其转录调控机制.方法:人脐静脉内皮细胞的培养和鉴定.用发色底物法测定PAI-1活性.North-ern印迹分析法检测PAI-1mRNA的水平.采用基因重组技术构建含不同长度PAI-1 5'上游序列的荧光素酶报告基因质粒,瞬时转染进入内皮细胞,并检测荧光素酶的表达情况.利用PCR和测序技术,对构建质粒上AP-1元件进行定点突变.Western blot印迹杂交检测内皮细胞核内激活蛋白-1(AP-1)蛋白水平.结果:50 mg/L mmLDL诱导HUVECs PAI-1活性和mRNA表达量明显增高,同时提高核内AP-1蛋白水平.mmLDL显著诱导构建质粒pGL3-PAI-1-1509/+90和pGL3-PAI-1-823/+90的荧光素酶活性,但对质粒pGL3-PAI-1-553/+90和pGL3-PAI-1-47/+90诱导作用不明显.当PAI-1 5'上游序列的3个AP-1元件突变后,mmLDL的诱导作用明显降低.结论:(1)mmLDL增强血管内皮细胞PAI-1活性与mRNA表达;(2)PAI-1活性提高与其mRNA表达增加呈正相关;(3)PAI-1 5'上游序列中3个AP-1元件在mmLDL对PAI-1诱导中具有重要调控作用.