抗转化生长因子β1的U1 snRNA嵌合型核酶体外剪切作用

摘要

目的:研究抗转化生长因子β1 U1snRNA嵌合型锤头状核酶的细胞外切割活性.方法:通过计算机设计针对TGFβ1的锤头状核酶,然后把合成的核酶片段克隆入含有U1 snRNA启动子/增强子和终止子的U1 snRNA核酶载体中.通过RT-PCR扩增获得TGFβ1的部分基因片段,将其克隆入T载体中T7启动子的下游,体外转录获得核酶和靶RNA,转录过程中掺入同位素,通过变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化回收.[32p]标记的核酶与靶RNA在不同条件下进行切割反应,变性PAGE电泳,放射自显影,分析反应结果.结果:活性的U1 snRNA嵌合型核酶(U1Rz803)在生理温度下具有良好特异的切割活性;而点突变型核酶U1Rz803m没有切割活性,因此这些结果显示U1Rz803设计是正确的.结论:本研究中制备的U1Rz803具有良好的特异催化切割活性.U1 snRNA嵌合型核酶U1Rz803有望在胞内抑制TGFβ1的表达,为研究转化生长因子(TGF)β1在造血调控中的作用机制提供有效工具.