重组人肝细胞生长因子在人脐带间质干细胞中高效表达

摘要

目的:构建能表达人肝细胞生长因子(hHGF)的pWPI-hHGF载体,并将含hHGF基因的重组慢病毒载体转染人脐带间质干细胞(hUCMSCs),观察人脐带问质干细胞中hHGF的表达情况.方法:将携带目的基因hHGF的pUC-SRa/hHGF质粒亚克隆到真核细胞表达载体pWPI载体上,构建重组质粒pWPI-hHGF.基因测序进行HGF的鉴定.用磷酸钙沉淀法,将pWPI-hHGF、pAX2、pMD2G共同转染包装细胞293T细胞,获得携带目的基因hHGF和GFP基因的重组慢病毒pWPI-hHGF.将pWPI-hHGF及阳性对照质粒pWPI-GFP分别用Lipofectamin 2000介导转染体外培养的hUCMSCs.在荧光显微镜下计数,确定阳性对照质粒的转染数,从而估计该基因的转染效率.蛋白印迹法检测HGF和GFP蛋白的表达,ELISA法检测细胞上清液hHGF含量.结果:DNA测序显示hHGF基因成功地插入到pWPI载体中.包装细胞293T转导pWPI-HGF质粒后,转染阳性率达100%.阳性对照质粒转染人脐带间质干细胞24 h后,在荧光显微镜下观察,其转染效率达80%以上.蛋白印迹法检测靶细胞中hHGF表达呈强阳性,而对照组表达量极低,两者差异显著(P<0.01).检测收集转染hHGF后的人间质干细胞上清液中hHGF的表达含量明显高于对照组(P<0.01).结论:构建的在真核细胞内表达hHGF的重组质粒pWPI-hHGF转染人脐带间质干细胞,能获得hHGF基因在人脐带间质干细胞中大量、稳定的表达.