CCKB受体诱发的小鼠神经元蛋白质磷酸化的研究

摘要

目的:从蛋白质可逆磷酸化修饰的角度初步勾勒出CCKB型受体介导的胞内信号转导途径.方法:培养的小鼠大脑皮质神经元分为实验组、对照组和受体拮抗剂组,在无磷培养基加入[32P]-NaH2PO4标记细胞中的磷蛋白后,刺激组给予CCK8(10-7mol/L),对照组加入等量的无磷培养基,受体拮抗剂组在分别加入CCKA型、CCKB型受体拮抗剂L364 718、L365 260以及L364 718+L365 260,浓度均为10-8 mol/L,孵育10 min后,再加入10-7 mol/L CCK8,37℃作用60 min,液氮中终止磷酸化反应.裂解细胞提取蛋白质,双向电泳分离,放射自显影7d后,获得磷酸化蛋白的放射自显影双向电泳图谱.采用PDQuest 2D分析软件对图谱进行差异分析,并在Swiss-Prot蛋白质数据库和自建磷蛋白数据库中查询定性.结果:CCK8作用60 min后,小鼠神经元CCK8信号转导相关磷酸化蛋白有:多种蛋白激酶、细胞信号分子、生长因子受体、转录因子等.加入L364 718后,神经元中PKCδ、P55G等的磷酸化水平降低,加入L365 260后,PKCα、PKGβ、OGFR、EGFR等的磷酸化水平呈现不同程度的降低,表明皮质神经元中CCKB受体介导的信号转导更复杂.结论:CCKA型、GGKB型受体均可介导CCK8在神经元的信号转导,但CCKB型受体可能发挥了更重要的作用,其介导的信号途径可能包括:肌醇磷脂信使系统、cAMP-PKA途径、MAPK途径、JNK途径、PI3K-PKB途径和cGMP-PKG途径.