GH与EGFR受体后信号交联在GH促进青春期大鼠生长板软骨细胞增殖中的作用

摘要

目的:观察促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)处理后青春期大鼠生长板体外培养的软骨细胞内是否存在生长激素(GH)与表皮生长因子受体(EGFR)之间的信号交联(cross-talk).方法:3周龄雌性SD大鼠开始注射GnRHa至7周龄;随后分离培养5-8只大鼠胫骨生长板软骨细胞,在GH作用前分别加入JAK2阻断剂AG490(1 nmol/L、10 nmol/L和100 nmol/L)、EGFR酪氨酸激酶阻断剂AG1478(0 1 nmol/L、1 nmol/L和10 nmol/L)和表皮生长因子(EGF)中和抗体(0.1 mg/L、1 mg/L和10 mg/L);采用四氮甲基唑蓝(MTT)以及免疫组化法测定增殖细胞核抗原(PCNA),观察不同阻断剂对软骨细胞增殖的影响;采用Western blotting检测软骨细胞p-ERK1/2及p-EGFR的表达.结果:GH作用后具有浓度依赖性地促进软骨细胞增殖和增加p-ERK1/2及p-EGFR水平的作用,100 μg/L时作用最为明显.AG490及AG1478几乎能完全抑制GH促进软骨细胞增殖和激活ERK1/2及EGFR的作用. 而EGF中和抗体仅能部分抑制GH的作用.结论:GH通过激活JAK2而激活其下游的ERK通路,实现其直接促细胞增殖效应.GH亦能通过激活EGFR及其信号转导通路促进细胞增殖效应,表明GH通路和EGF通路间存在相互作用.