急性白血病细胞系中SFRP基因启动子甲基化及去甲基化诱导表达的研究

摘要

目的:探讨分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)基因家族启动子CpG岛异常甲基化状态与急性白血病(AL)发生发展的关系,以及DNA甲基转移酶(DNMT)抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷酸(5-Aza-CdR)去甲基化诱导SFRP基因表达作用的可能机制.方法:采用甲基化特异性PCR检测不同AL细胞系(Molt-4、Jurkat、m-60和NB4)和不同浓度5-Aza-CdR作用下Jurkat细胞系中SFRP1、SFRP2、SFRP4和SFRP5基因启动子区的甲基化状态,采用实时荧光定量RT-PCR检测SFRP1、SFRP2、SFRP4和SFRP5 mRNA表达,采用半定量RT-PCR检测DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA表达.结果:在正常人细胞中不存在SFRP基因的甲基化.SFRP1、SFRP2和SFRP5基因在HL-60、NB4、Molt-4和Jurkat细胞系中均呈完全甲基化状态;SFRP4基因在NB4、Molt-4和Jurkat细胞系中完全甲基化,在HL-60细胞系中则部分甲基化.5-Aza-CdR可逆转SFRP1、SFRP2、SFRP4和SFRP5基因的高甲基化状态,并能够下调DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA水平,诱导SFRP基因恢复表达.结论:在AL细胞系中,SFRP1 、SFRP2、SFRP4和SFRP5基因出现高甲基化,与AL的发生密切相关,可能成为AL新的基因标志物.5-AzaCdR通过抑制DNMT表达,逆转SFRP基因的甲基化状态,恢复其表达.