胶质瘤miR-218与细胞周期蛋白依赖性激酶6表达的相互关系及其对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响

摘要

目的探讨胶质瘤细胞中miR-218及细胞周期蛋白依赖性激酶6（CDK6）表达变化的相互关系及其对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法采用组织微阵列、锁定寡核苷酸探针原位杂交及免疫组织化学（ABC法）方法,检测60例不同级别胶质瘤组织标本及10例对照脑组织中miR-218、CDK6及Ki-67抗原的表达状况,并分析三者之间的相互关系;胶质母细胞瘤细胞系（U87MG）分别被转染阴性对照序列（对照组）及miR-218mimics（mimics组）,采用即时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）及免疫细胞化学方法分别检测两组细胞中的miR-218水平及CDK6和Ki-67表达变化,用单细胞凝胶电泳检测凋亡细胞。结果对照组、Ⅰ～Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级胶质瘤组miR-218阳性标记指数（LI,%）分别为22.45±0.59、4.00±1.07、1.87±1.06、0.94±0.78,四组间差异均有统计学意义（P＜0.05）;各组CDK6 LI分别为7.25±1.20、16.71±0.80、24.43±0.62、32.05±0.43,对照组与各胶质瘤组间及Ⅳ级组与Ⅰ～Ⅱ级组间差异有统计学意义（P＜0.01）;各组Ki-67阳性细胞密度分别为0.00±0.00、9.30±3.48、31.15±9.44、60.15±13.60[（x±s）/0.05mm~2],各组间差异均有统计学意义（P＜0.01）;miR-218 LI与CDK6 LI及Ki-67阳性细胞密度间均呈显著性负相关（r=-0.480,-0.534,P＜0.01）,后两者间呈显著性正相关（r=0.530,P＜0.01）。mimics组的miR-218水平明显高于对照组,其CDK6及Ki-67LI（14.74±1.19、30.88±3.31）均明显低于对照组（79.06±2.07、64.94±3.96,P＜0.01）,而凋亡指数（68.44±7.05）明显高于对照组（13.04±0.97）,以上各指标两组间差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论 miR-218表达水平是评价胶质瘤良恶性程度的重要参考指标;其表达异常减少可导致胶质瘤细胞CDK6表达及增殖活性增强;补充外源性miR-218可有效下调恶性胶质瘤细胞CDK6表达、抑制其增殖和促进其凋亡,故在恶性胶质瘤基因治疗中具有重要的潜在应用价值。