GDC-0941联合AZD6244对KRAS突变非小细胞肺癌细胞的增殖抑制作用

摘要

目的探讨选择性PI3K抑制剂联合MEK抑制剂对携带KRAS/PTEN双突变的非小细胞肺癌细胞系NCI-H157的生长增殖和凋亡的影响及相关分子机制。方法常规培养NCI-H157细胞并分别用不同浓度的PI3K抑制剂GDC-0941和MEK抑制剂AZD6244单独或联合作用,四甲基偶氮唑盐（MTT）法初步观察对细胞生长增殖的影响。根据观察结果确定联合给药的浓度。然后分为无药对照组、PI3K抑制剂单独用药组（GDC-0941,0.5和5.0μmol/L）、联合Ⅰ组（0.5μmol/LAZD6244+0.5μmol/L GDC-0941）及联合Ⅱ组（5.0μmoL/L AZD6244+5.0μmol/L GDC-0941）。细胞经过不同的作用后,MTT法绘制增殖抑制曲线;平板集落形成法检测集落形成能力的改变;流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布;Western blot检测不同组中抑制剂靶点下游周期及凋亡相关蛋白表达的差异。结果抑制剂单独作用于NCI-H157细胞可抑制其生长增殖。联合用药组与PI3K抑制剂单独用药组相比,细胞的生长增殖抑制作用增强,联合Ⅰ组表现为两药协同作用,联合Ⅱ组表现为两药相加作用;集落形成能力下降[（77.20±1.54）个/孔比（61.50±2.12）个/孔,P＜0.01]和[（51.00±4.00）个/孔比（22.50±3.53）个/孔,P＜0.01];凋亡率增加[（18.30±0.82）%比（21.32±0.56）%,P＜0.01]和[（27.14±1.58）%比（42.45±4.42）%,P＜0.01];细胞周期发生改变,联合用药组G0/G1期细胞增加,S期细胞减少（P＜0.05）。Western blot显示,联合用药组与PI3K单独用药组相比,cyclin D1、cyclin B1表达量减少,p21表达量和PARP剪切增加,bcl-2/bax的比值下降。结论 PI3K抑制（AZD6244）可协同MEK抑制（GDC-0941）诱导NCI-H157细胞发生生长增殖抑制和凋亡,但联合用药效果受到药物剂量的影响。