探讨偏头痛大鼠三叉神经节内可能调控CGRP表达的微小RNA

摘要

目的:探索偏头痛大鼠三叉神经节内异常表达的微小RNA(microRNA,miRNA)以及可能参与调节降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)基因表达的miRNA.方法:本研究中共选取36只180～220 g的雄性SD大鼠,每个实验中的大鼠均随机分组.首先,用炎性复合物(inflammation soup,IS)刺激大鼠硬脑膜来进行偏头痛大鼠模型的制备,并监测术后以及IS刺激硬脑膜后大鼠眶周机械痛阈的变化;其次,通过三个计算机程序预测出可能作用于CGRP基因的miRNA;然后,用蛋白质印迹法获得致炎剂组(IS组)大鼠三叉神经节内CGRP的量的变化;再次,用miRNA芯片技术得到IS-2 d组大鼠三叉神经节内miRNA的表达谱差异,并用实时定量PCR法对特别挑选出的miRNA的表达差异进行验证;最后,结合上述实验结果获得可能靶向作用于CGRP基因的miRNA.结果:根据观察,术后第五天大鼠的眶周痛阈与术前无明显差异,而IS-2 d组大鼠在术后第7天和第8天注射IS后2h,其大鼠眶周痛阈较术前以及对照组均明显降低;根据miRanda、TargetScan和PITA三个软件的预测结果,共207个miRNA被预测出可能参与CGRP基因的表达调控;另外,与sham-8 d组相比,IS-2 d组大鼠三叉神经节内CGRP表达量显著增加、且有158个异常表达的miRNA;最后,在根据芯片结果的miRNA异常表达倍数及预测出的与CGRP基因表达调节相关性挑选出的6个miRNA的定量PCR实验结果中,miR-30a-3p和miR-449a-5p的表达量均显著下调.结论:miR-30a-3p和miR-449a-5p有可能参与了偏头痛大鼠三叉神经节中CGRP基因的表达调控.