小鼠耳蜗螺旋神经节细胞电压依赖性离子通道的研究

摘要

目的　了解小鼠耳蜗螺旋神经节细胞电压依赖性离子通道的特性。方法　采用耳蜗螺旋神经节细胞与耳蜗基底膜整体培养和膜片钳全细胞记录方法。结果　采用出生后 0至 5d的C5 7BL/ 10J小鼠 (n =30 ) ,耳蜗螺旋神经节细胞与基底膜一道取出 ,培养 8～ 48h后 ,基底膜内侧和周围散落的螺旋神经节细胞贴壁良好 ,便于进行生理学记录。螺旋神经节细胞根据在电流钳记录下有无动作电位来鉴别 ,健康的细胞在刺激电流的起始端和结束端均可记录到动作电位。细胞平均静息电位 ( x±s,下同 )为 (- 5 5± 5 )mV(n =39) ,平均动作电位幅度为 (- 6 1± 11)mV(n =31)。用电压钳方法在Hank液中可记录到快速的TTX敏感型内向钠电流和TEA、4-AP敏感型外向持续性钾电流 ,平均电流幅度 ( x±s,下同 )分别为 (- 2 .0± 1.1)nA(n =39)和 (3.0± 1.3)nA(n =39)。在含有高浓度钡离子的细胞外液中 ,阻断钾电流和钠电流后 ,可记录到幅度为 (- 1.0± 0 .7)nA(n =2 0 )的钙电流。部分细胞还记录到大约 2 0次 /s的自发性放电 (n =4) ,放电幅度约为 2nA。结论　新生小鼠 (小于 5d)螺旋神经节细胞可随基底膜一道从耳蜗中分离培养。培养 8～ 48h后的螺旋神经节细胞活性良好 ,便于进行生理学记录。达到全细胞记录状态后 ,大部分细胞可记录到动作?