利用RNA干扰效应阻抑鼻咽癌细胞bcl-xL基因表达和诱导癌细胞凋亡的研究

摘要

目的 研究RNA干扰（RNAinterference）效应对人鼻咽癌低分化上皮细胞株CNE- 2Zbcl- xL基因表达的抑制作用及其对CNE- 2Z细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用。方法 使用美国Ambion公司提供的网上设计软件设计针对人bcl- xL基因的小干扰RNA（siRNA）序列,体外转录试剂盒合成siRNA;荧光素标记试剂盒标记siRNA;脂质体法将siRNA转入CNE -2Z细胞株。荧光显微镜下观察siRNA的转染效率;RT- PCR法半定量检测siRNA对bcl- xL基因表达的抑制作用;噻唑蓝法检测siRNA对细胞生长增殖抑制作用;流式细胞术检测siRNA诱导细胞凋亡作用。结果 荧光显微镜下荧光素标记的siRNA转染组可见到细胞内清晰的绿色荧光,而在未转染siRNA对照组未见;各siRNA转染组bcl- xLmRNA表达水平有不同程度的下调,下调范围在10% ~70%之间,而在未转染对照组内bcl xLmRNA表达水平无明显改变;细胞生长增殖抑制率在一定范围内具有剂量依赖性（剂量增加,抑制率增高）和时间依赖性;各浓度siRNA4转染组可不同程度诱导CNE -2Z细胞凋亡。结论体外转录合成的siRNA能特异有效地下调bcl- xL基因的表达,不同序列特异性的siRNA下调bcl -xL基因表达的能力不同;瞬时转染bcl- xLsiRNA4能有效抑制鼻咽癌细胞增殖并诱导其凋亡;siRNA不仅为基因组功能分析提供了强有力的工具,而?