TRAIL基因与顺铂协同诱导横纹肌肉瘤细胞凋亡的实验研究

摘要

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因(TRAIL)和顺铂联合应用对人RD胚胎型横纹肌肉瘤细胞的生长抑制和凋亡的诱导作用.方法将重组腺病毒载体(Ad)介导的TRAIL基因作用于人RD胚胎型横纹肌肉瘤细胞,通过电镜、MTT比色法、RT-PCR及流式细胞仪方法,观察和分析其对RD胚胎型横纹肌肉瘤细胞作用的效果,并与联合应用顺铂的效果进行对比,分析其作用机制.结果 MTT法显示顺铂浓度为1.0μg/ml、5.0μg/ml和10.0μg/ml对RD细胞生长的抑制率分别为9.8%、23.4%和43.8%;按MOI值1000转染腺病毒Ad/GT-TRAIL对RD细胞生长的抑制率为41.2%,再联合Ad/PGK-GV16后,生长抑制率上升到52.5%;Ad/GT-TRAIL联合Ad/PGK-GV16再加用顺铂后的生长抑制率为72.7%.顺铂作用3 d后的凋亡率为7.41%;Ad/GT-TRAIL联合Ad/PGK-GV16作用3 d后的凋亡率为12.95%;Ad/GT-TRAIL联合Ad/PGK-GV16再加用顺铂作用3 d后的凋亡率为23.24%,而1640对照组的凋亡率为2.19%.顺铂作用后,细胞的cFLIP mRNA表达下调,与细胞凋亡增加的改变相一致.结论 Ad/GT-TRAIL能有效诱导横纹肌肉瘤细胞的凋亡,从而抑制横纹肌肉瘤细胞的生长,联合应用顺铂后能显著提高疗效.