葛根素通过HMGB1/TLR4/NF-κB轴抑制自噬减轻体外模型缺血再灌注损伤

摘要

目的本研究旨在探讨葛根素对人肾组织性缺氧/复氧（H/R）诱导的急性肾损伤的体外保护作用。方法利用肾小管上皮细胞（HK 2）细胞和H/R处理模拟缺血再灌注损伤的体外实验。实验分为对照组（Control）、H/R处理组（0、6、12和24 h）、H/R 24 h +葛根素处理组、H/R 24 h +葛根素+ 3-甲基腺嘌呤（3-MA, Ⅲ类磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂）处理组、H/R 24 h + 3-MA处理组。采用免疫印迹法（WB）检测自噬相关蛋白的表达变化, 用细胞计数试剂-8（CCK-8）检测细胞增殖情况, 电子显微镜检测自噬体形成, 原位末端转移酶标记技术（TUNEL）检测凋亡。结果与对照组相比, H/R处理组（24 h）微管相关轻链3-II（LC3-II）的表达增加, 且自噬标志物P62的表达减少, 自噬体数目增多, 细胞活力降低, 细胞出现炎症反应。葛根素作用与3-MA作用接近, 与H/R处理组（24 h）相比, 加入葛根素处理后可逆转H/R诱导的LC3、P62表达水平变化（P＆0.05）, 表现为细胞活力增加, 降低了自噬体数目, 减轻了细胞凋亡（P＆0.05）。同时高迁移率族蛋白1（HMGB1）、Toll样受体4（TLR4）和活化B淋巴细胞的核因子κ-轻链增强子（NF-κB）的蛋白表达水平降低（P＆0.05）。结论葛根素可以通过HMGB1/TLR4/NF-κB轴抑制自噬来减轻体外模型的缺血再灌注损伤。