老年大鼠肝脏缺血再灌注损伤抑制自噬的作用机理

摘要

目的 探究老年大鼠肝脏缺血再灌注损伤抑制自噬的作用及其机理。方法 选取鼠龄为3个月（3M）和24个月（24M）健康雄性Lewis大鼠,采用随机数字表法将大鼠分为3M IRI组、3M假手术组、24M IRI组、24M假手术组。实验组采用无创血管夹夹闭肝左叶及中叶血流（约70%肝缺血）,肝脏在常温下（37 ℃±0.5 ℃）缺血30 min,再灌注6 h。假手术组仅解剖分离肝十二指肠韧带。术后6 h,采集各组大鼠血清样本,检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）等肝功能指标,取各组大鼠肝组织进行肝脏病理检查,共聚焦显微镜下观察各组大鼠肝组织中LC3B自噬小体的数量,并采用蛋白质印迹法分析自噬相关蛋白的变化。结果 经历缺血再灌注损伤后,24M IRI组大鼠血清ALT和AST水平较3M IRI组显著升高,两组比较,差异有统计学意义（P＆0.05）。肝脏病理检查结果显示,3M IRI组大鼠肝脏主要表现为点灶状坏死,24M IRI组大鼠肝脏主要表现为片状坏死及混合炎症细胞浸润。共聚焦结果显示,24M假手术组大鼠肝组织中自噬小体数量较3M假手术组略有下降,但经历缺血再灌注损伤后,24M IRI组大鼠肝组织中自噬小体数量较3M IRI组显著下降（P＆0.05）,并且24M IRI组大鼠肝组织自噬相关蛋白（Beclin1蛋白和ATG4B蛋白）水平较3M IRI组严重下调（P＆0.05）。结论 老年大鼠肝脏缺血再灌注损伤抑制了自噬作用,其机理可能与肝脏缺血再灌注损伤使自噬相关蛋白水平的显著下降有关。