全细胞膜片钳结合单细胞RT-PCR技术在NMDA诱导的小鼠青光眼模型视网膜双极细胞G蛋白通路研究中的应用

摘要

目的：介绍一种视网膜全细胞膜片钳联合单细胞逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术在视网膜单细胞信号成分分析中的应用，并研究N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）对ON型双极细胞中G蛋白相关mRNA表达的影响。方法：实验研究。3～5周龄C57BL／6J／小鼠20只随机分为2组，每组各10只，分别玻璃体腔注射3μlNMDA（30nmol／L）构建青光眼模型，3μl PBS（10nmol／L）作为对照组，24h后取视网膜，膜片钳下钳取单个ON型双极细胞，并做RT-PCR观察几种目的mRNA的表达差异。2组间各参数比较采用Mann．Whitney检验。结果：RT-PCR结果显示蛋白激酶Cα亚基（PKca）、瞬时感受电位离子通道1（TRPM1）、G蛋白α亚单位（Gα0）的表达在NMDA青光眼模型构建后分别为0．536±0．339、0．337±0．271、4．36±1．83，构建前后差异有统计学意义（U=O，P=-O．001；U=O，P=O．002；U=36，P=O．002o结论：NMDA诱导的青光眼模型可影响视网膜ON型双极细胞G蛋白耦联通道的信号传导。