视网膜色素上皮细胞直接铺片法与剥离铺片法比较

摘要

目的介绍2种视网膜色素上皮（RPE）细胞铺片实验技术，比较其实验操作的难易程度及对RPE细胞形态和铺片完整性的影响。方法实验研究。直接铺片法：大鼠眼球取出后用4％多聚甲醛固定30min，解剖眼球，去除眼前段部分和眼内容物，小心剥去视网膜，将RPE贴附的眼后段部分剪成花瓣形并平整贴附在载玻片上，继续固定过夜。剥离铺片法：大鼠眼球取出后用4％多聚甲醛固定过夜，解剖眼球，去除眼前段部分和眼内容物，小心剥去视网膜，用镊子将RPE—Bruch膜复合物从眼球上分离，保存在PBS液中。结果剥离铺片法能得到完整RPE细胞铺片，RPE细胞形态完整：直接铺片法中RPE细胞部分丢失，铺片边缘的RPE细胞被部分破坏。结论直接铺片法操作简便，难度小，但容易破坏边缘的RPE细胞。剥离铺片法操作难度大，但对RPE细胞破坏程度小。