转染Smad7基因的人眼球筋膜囊成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白及纤维连结蛋白表达的改变

摘要

目的 观察转染Smad7基因的人眼球筋膜囊成纤维细胞(HTFs)Ⅰ型胶原蛋白和纤维连结蛋白表达的改变.方法 用NucleofectorTM核酸转染仪将含有Smad7的真核表达质粒转染至HTFs.采用实时定量逆转录聚合酶链反应法检测Ⅰ型胶原蛋白及纤维连结蛋白mRNA表达的改变.采用放射免疫法检测Ⅰ型前胶原羧端肽原(PICP)在培养液中浓度的改变,检测经转化生长因子β2(TGF-β2,10 ng/ml)作用后以上指标的改变.以未转染HTFs和转染空质粒的HTFs作为对照.结果 成功将含有Smad7基因的质粒转染至HTFs,并证明其Smad7基因mRNA表达明显升高.转染Smad7的HTFs Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达率为(89.53±9.37)%,分别是对照组HTFs的40.47%和pCMV5-HTFs的37.94%.培养液中PICP浓度为(15.29±2.18)μg/L,分别是对照组HTFs的52.10%和pcMV5-HTFs的57.35%.转染Smad7的HTFs能够明显拮抗由TGF-β2作用引起的Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达和PICP浓度升高(P＜0.01);无论是否有TGF-β2作用,转染Smad7的HTFs纤维连结蛋白mRNA的表达与对照组相比,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 Smad7能降低HTFsⅠ型胶原蛋白mRNA表达和Ⅰ型胶原蛋白的合成,但对纤维连结蛋白mRNA表达无明显作用.(中华眼科杂志,2007,43:124-128)