Rho相关激酶抑制剂thiazovivin对人角膜内皮细胞形态和功能影响的研究

摘要

目的探讨N-芐基-2-（嘧啶-4-基氨基）（Thiazovivin）对人角膜内皮细胞（HCEC）形态和功能的影响。方法实验研究。培养原代HCEC, 采用光镜观察细胞形态及神经元特异性烯醇化酶（NSE）的免疫荧光实验进行鉴定。以N-钙黏着蛋白（N-cadherin）和钠钾泵（Na+/K+-ATPase）为指标, 通过免疫荧光实验考察添加不同浓度（0、2、4、6 μmol/L）Thiazovivin作用不同时间（24及48 h）对原代HCEC形态和离子泵功能的影响, 以期筛选出改善HCEC形态和离子泵功能效果最佳的Thiazovivin的浓度及作用时间。最后通过免疫荧光实验和免疫印迹实验考察Thiazovivin对Rho相关激酶（ROCK）表达的影响。结果培养的原代HCEC的NSE染色均匀, 荧光强度明显, 细胞呈六边形紧密排列。原代HCEC在0、2、4、6 μmol/L的Thiazovivin分别作用24 h后, Na+/K+-ATPase抗体染色后的平均吸光度（A）值分别为1.27±0.08、3.72±0.17、21.07±4.67、3.69±0.34, 4 μmol/L的Thiazovivin的Na+/K+-ATPase免疫荧光表达最强, 其A值最大;通过N-cadherin免疫荧光染色, 发现HCEC在4 μmol/L Thiazovivin作用24 h后, 细胞轮廓清晰, 细胞结构完整。而4 μmol/L的Thiazovivin作用时间延长至48 h, 通过N-cadherin和Na+/K+-ATPase免疫荧光染色, 发现与其作用24 h相比, 荧光强度无明显变化, 但细胞排列比24 h时略整齐。此外, Thiazovivin能减弱ROCK免疫荧光染色的荧光强度及下调ROCK蛋白表达。结论 Thiazovivin对原代HCEC的形态、连接和离子泵功能具有保护作用, 4 μmol/L Thiazovivin作用24 h对细胞形态、连接及离子泵功能的改善效果最佳, 且Thiazovivin可显著抑制ROCK蛋白表达。（中华眼科杂志, 2016, 52:686-692）