肺癌肿瘤全溶物脉冲自体树突状细胞体外诱生T细胞抗肿瘤反应的研究

摘要

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者全瘤溶解物(WTL)冲击的自体树突状细胞(DCs)瘤苗体外诱生T细胞介导的抗肿瘤反应.方法在含重组人粒细胞-巨噬细胞-集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素-4(rhIL-4)的培养条件下,以10例患者的贴壁外周血单核细胞(PBMCs)衍生不成熟的树突状细胞(imDCs),分别添加肿瘤坏死因子(TNFα)、自体WTL或WTL+TNFα诱导成熟,即分别为DCs/TNF、DCs/WTL和·DCs/WTL,用流式细胞仪和混合淋巴细胞反应 (MLR),检测细胞表面分子的表达变化及其刺激异基因或同基因的T细胞增殖能力.将·DCs/WTL和自体T细胞共培养1～2周,以诱导细胞毒性T 淋巴细胞(CTL),用计数γ-干扰素(IFN-γ)释放的酶联免疫斑点(ELISPOT)试验和乳酸脱氢酶(LDH)释放的细胞毒试验,分别检测该CTL中识别自体肿瘤细胞释放特异性IFN-γ的T细胞数和溶瘤活性.结果以30 μg/ml蛋白的WTL体外冲击自体106imDCs,可导致上调DC表型,包括CD1a 、CD83和CD86以及HLA-DR的分子表达,与常规TNFα诱导成熟的DCs表型相似.虽然两者均能显著刺激异基因T细胞的增殖,但其刺激自体T淋巴细胞的增殖能力,DCs/WTL却显著高于DCs/TNF(P<0.05).将体外与·DCs/WTL共培养的自体T细胞作为反应或效应细胞,再次与同一患者的·DCs/WTL共培养时,有1/3培养物能检出释放其特异性IFN-γ的T细胞,显著高于仅用DCs/TNF加IL-2或单纯IL-2刺激的T细胞(P<0.05).LDH试验表明,自体·DCs/WTL 诱生的CTLs,虽然杀伤K562细胞的能力与LAK细胞相当,但其杀伤自体肿瘤细胞的能力却显著高于LAK细胞(P<0.05).结论术后肺癌患者单核细胞衍生的DC具有功能性抗原递呈细胞的效能,体外不仅能诱生自体T细胞介导的抗肿瘤反应,而且也能增强NK细胞杀伤活性.