热休克蛋白90抑制剂FW–04–806对Bcr/Abl阳性白血病细胞的体外抗肿瘤作用及其机制

摘要

目的研究HSP90抑制剂FW–04–806对Bcr/Abl阳性白血病细胞（K562和HL60/Bcr–Abl）的体外抗肿瘤活性及其机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测FW–04–806对HL60、K562和HL60/Bcr–Abl细胞的增殖抑制作用,碘化丙啶（PI）染色法检测FW–04–806对K562细胞细胞周期的影响,annexin V–FITC/PI双染法检测FW–04–806对K562和HL60/Bcr–Abl细胞凋亡的影响,Western blot法检测FW–04–806对K562和HL60/Bcr–Abl细胞增殖和凋亡通路相关蛋白表达的影响,线粒体膜电位法检测FW–04–806对K562和HL60/Bcr–Abl细胞线粒体膜电位的影响,免疫共沉淀法检测FW–04–806对K562和HK60/Bcr–Abl细胞中HSP90/CDC37/Bcr–Abl复合物形成的影响,实时定量PCR法检测FW–04–806对K562和HL60/Bcr–Abl细胞中Bcr/Abl mRNA表达水平的影响。结果 FW–04–806对HL60、K562和HL60/Bcr–Abl细胞的增殖均有明显的抑制作用,其IC50分别为（30.89±0.12）μmol/L、（9.76±0.19）μmol/L和（8.03±0.26）μmol/L,差异有统计学意义（P＆0.001）。20和40 μmol/L FW–04–806作用于K562细胞24 h后,K562细胞的凋亡率分别为（17.40±0.34）%和（34.33±5.00）%,与对照组[（8.30±0.53）%]比较,差异有统计学意义（P=0.003）;20和40 μmol/L FW–04–806作用于HL60/Bcr–Abl细胞24 h后,HL60/Bcr–Abl细胞的凋亡率分别为（18.90±1.45）%和（35.60±3.55）%,与对照组[（8.11±2.62）%]比较,差异有统计学意义（P=0.001）。不同浓度FW–04–806处理K562和HL60/Bcr–Abl细胞24 h后,K562和HL60/Bcr–Abl细胞中p–Bcr–Abl及下游p–Stat和p–Crkl呈浓度依赖性降低,AKT、ERK、C–Raf蛋白及其磷酸化水平亦呈浓度依赖性降低。FW–04–806可使K562和HL60/Bcr–Abl细胞的膜电位水平呈浓度依赖性下降,并可干扰K562和HL60/Bcr–Abl细胞中CDC37与HSP90的结合,抑制HSP90/CDC37/Bcr–Abl复合物的形成,但对Bcr–Abl mRNA的表达无明显影响。结论 FW–04–806能明显抑制Bcr/Abl阳性白血病细胞的增殖,并促进其发生凋亡,具有明显的体外抗肿瘤活性。