间质干细胞对顺铂诱导人乳腺癌细胞凋亡的作用

摘要

目的分离、培养、鉴定乳腺癌来源间质干细胞（BC-MSCs）及癌旁组织来源间质干细胞（BN-MSCs）,探讨其对顺铂（DDP）诱导的人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响。方法采用组织贴壁法分离培养BC-MSCs和BN-MSCs,成骨、成脂诱导法检测BC-MSCs的分化能力,流式细胞术检测BCMSCs和BN-MSCs的表面标记。收集BC-MSCs和BN-MSCs 48 h培养上清液,分别与DDP共同处理MCF-7细胞,四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验检测不同处理组MCF-7细胞增殖抑制率,Muse全能细胞分析仪检测MCF-7细胞凋亡和活力情况,Luminex液态芯片技术检测MSCs培养上清中白细胞介素6（IL-6）水平,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测不同处理组MCF-7细胞中IL-6 mRNA的表达水平。结果成功分离培养出BC-MSCs和BN-MSCs,镜下呈纤维样长梭形,高表达CD29、CD44,不表达CD14、CD34,诱导后可分化为脂肪细胞和成骨细胞。2.5、5、10、20、40、80μmol/L DDP作用MCF-7细胞48 h后,DDP组的细胞抑制率分别为（17.33±2.00）%、（22.37±0.73）%、（30.77±1.23）%、（44.93±1.27）%、（62.03±1.97）%和（73.93±1.10）%,DDP+8BC-MSCs组的细胞抑制率分别为（8.27±0.63）%、（11.50±1.30）%、（20.57±0.93）%、（32.60±1.90）%、（52.27±0.73）%和（62.13±2.17）%,DDP+BNMSCs组的细胞抑制率分别为（12.90±1.60）%、（16.53±2.87）%、（25.90±1.50）%、（39.40±2.40）%、（57.40±0.70）%和（69.03±1.07）%,DDP+BC-MSCs组的细胞抑制率明显低于DDP组,差异有统计学意义（P＜0.05）。DDP组、DDP+BC-MSCs组和DDP+BN-MSCs组的细胞凋亡率分别为（47.77±1.98）%、（29.20±2.12）%和（37.92±2.21）%,DDP+BC-MSCs组与DDP组差异有统计学意义（P＜0.05）。DDP组、DDP+BC-MSCs组和DDP+BN-MSCs组的细胞活力比值分别为0.52±0.02、0.72±0.02和0.64±0.02,DDP+BC-MSCs组与DDP组差异有统计学意义（P＜0.05）。Luminex液态芯片分析结果显示,BC-MSCs组的IL-6水平是BN-MSCs组的（2.50±0.68）倍,差异有统计学意义（P＜0·05）。DDP组和DDP+BC-MSCs组的IL-6 mRNA相对表达量分别为1.02±0.10和7.58±0.55,差异有统计学意义（P＜0.01）。DDP+BC-MSCs组和DDP+BC-MSCs+IL-6中和抗体组的细胞凋亡率分别为（27.41±1.95）%和（42.45±2.87）%,差异有统计学意义（P＜0.05）。DDP+BC-MSCs组和DDP+BC-MSCs+IL-6中和抗体组的细胞活力分别为（72.40±2.60）%和（59.76±3.89）%,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论成功地分离、培养出BC-MSCs和BN-MSCs。与BN-MSCsL比较,BC-MSCs能够改善DDP对MCF-7细胞的作用,显著减少DDP诱导MCF-7细胞的凋亡,促进增殖与活力,且与其分泌的IL-6有关。