沉默G6PD对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响及其作用机制

摘要

目的探讨葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶(glucose‑6‑phosphate dehydrogenase,G6PD)在卵巢癌细胞顺铂耐药中的作用及其潜在的机制。方法通过低浓度加量持续诱导法构建卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/CDDP,采用Label‑free定量蛋白质组学法分析A2780和A2780/CDDP细胞差异蛋白G6PD,Western blot和RT‑qPCR检测G6PD表达情况。通过siRNA技术将siRNA‑G6PD及其阴性对照(siRNA‑NC)转染至A2780/CDDP细胞,然后采用Western blot验证G6PD基因沉默效果,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,流式细胞仪和酶标仪检测铁死亡相关物质活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)和脂质过氧化物的表达水平。结果与A2780细胞相比,A2780/CDDP细胞中有95个上调蛋白和102个下调蛋白,其中上调蛋白中以G6PD表达差异最为显著;这些蛋白大多富集在代谢通路,且其功能主要与细胞氧化应激反应、核糖磷酸代谢途径相关。与A2780细胞相比,A2780/CDDP细胞中G6PD mRNA和蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05),铁死亡相关物质ROS、MDA和脂质过氧化物水平均降低(均P<0.05),而GSH水平升高(P=0.001)。沉默G6PD后的A2780/CDDP细胞中顺铂的IC_(50)值降低(P=0.012),细胞凋亡率升高(P=0.006),铁死亡相关物质ROS、MDA和脂质过氧化水平均升高(均P<0.05),而GSH水平降低(P=0.007)。结论沉默G6PD可能通过诱导卵巢癌顺铂耐药细胞A2780/CDDP中的铁死亡水平而增强顺铂敏感性。