利用发根农杆菌体系检测大豆CRISPR/Cas9系统的靶点

摘要

作为一种基因编辑的新技术,CRISPR/Cas系统已被广泛应用于各种生物的基因工程中.但CRISPR/Cas9基因编辑系统还存在着一定的脱靶现象,确定基因编辑靶点选择的可行性可提高基因编辑效率.本研究选用大豆GmCO基因为靶标,使用CRISPR/Cas9基因编辑系统来构建靶点的基因敲除载体,并且利用发根农杆菌K599菌株对大豆子叶进行侵染,再通过植物组织培养的方法促使大豆外植体长出不定根,通过不定根检测发现在靶点2处出现了碱基的缺失,说明成功实现了对大豆目标基因的编辑.此方法操作简单,周期短,实现了对大豆中选择靶点的可行性的快速鉴定,为研究大豆的GmCO基因功能和遗传改良方面提供了新的技术支持.