阻断Rac1对转化生长因子-β诱导视网膜色素上皮细胞行为改变的作用研究

摘要

目的观察转化生长因子β1（TGF-β1）诱导视网膜色素上皮（RPE）细胞间质样转分化（EMT）过程中Rac1在其细胞学行为改变中的作用。方法人RPE-19细胞分为空白组、TGF-β1组、TGF-β1+NSC23766组、NSC23766组。所有实验于加入TGF-β1前2h给予NSC23766以封闭Rac1受体。免疫荧光、蛋白免疫印迹法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达;细胞划痕、侵袭及凝胶收缩实验,观察NSC23766对细胞迁徙、侵袭、凝胶收缩作用。结果 TGF-β1组细胞中α-SMA荧光表达较空白组、TGF-β1+NSC23766增强,差异有统计学意义（F=825.314,P=0.003）;细胞划痕实验结果显示,TGF-β1组细胞间距小于TGF-β1+NSC23766组,差异有统计学意义（P24h=0.04,P48h=0.001）;与空白组细胞间距比较,差异无统计学差异（P=0.278）。细胞侵袭实验结果显示,TGF-β1组穿过纤维膜的细胞数与空白组、TGF-β1+NSC23766组、NSC23766组穿过纤维膜的细胞数比较,差异无统计学意义（F=0.371,P=0.055）。凝胶收缩实验结果显示,TGF-β1组能明显增加细胞的促凝胶收缩能力,组间差异有统计学意义（F=40.473,P=0.014）,TGF-β1组相对TGF-β1+NSC23766组,差异有统计学意义（P=0.022）。结论Rac1在TGF-β1诱导RPE细胞凝胶收缩改变中发挥作用;NSC23766可通过调控Rac1活化抑制RPE细胞学行为的改变。