丝裂原细胞外信号反应激酶阻断剂对缺氧诱导人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

摘要

人视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium，RPE)细胞为位于视网膜感光细胞和脉络膜血管之间的单层细胞，正常情况下RPE细胞既不增殖也不迁移，而在病理情况下，具有游走、分泌、增殖和转化的潜能，RPE与许多眼科疾病的发生有关，如增殖性玻璃体视网膜疾病、视网膜新生血管性疾病、年龄相关性黄斑变性等。这些疾病的发生均可导致病人的视功能下降，影响病人生活质量。 目的：探讨特异性丝裂原细胞外信号反应激酶Ⅰ(MEKI)阻断剂(PD98059)对缺氧刺激的人视网膜色素上皮细胞增殖的影响，并初步探讨其作用机制。 方法：利用95﹪N2和5﹪C02混合气体建立培养的人RPE细胞缺氧模型，用三种不同浓度的P42/P44MAPK特异性阻断剂PD98059处理RPE细胞，在缺氧24小时后用MTT的方法检测细胞的增殖情况，用RT-PCR的方法检测周期蛋白D的mRNA的表达，并收集细胞进行流式细胞仪的检测，判断细胞的周期情况，用Westernblot检测ERK与磷酸化ERK的蛋白浓度 结果：(1)P42/P44MAPK途径抑制剂对RPE细胞的影响：缺氧组RPE细胞的数量与正常组相比明显增加(P≤0.05)；P42/P44MAPK途径抑制剂可以抑制RPE细胞的增殖，并且具有浓度依赖性。 (2)P42/P44MAPK途径抑制剂对CyclinD的影响：缺氧组CyclinD较正常组明显增加(P≤0.05)；P42/P44MAPK途径抑制剂对CyclinD的mRNA有抑制作用，并具有浓度依赖性。 (3)P42/P44MAPK途径抑制剂对RPE细胞周期的影响：缺氧组G1期细胞明显增多，加入P42/P44MAPK途径抑制剂后G1期细胞明显增加，且具有浓度依赖性。 (4)P42/P44MAPK途径抑制剂对ERK蛋白的影响：缺氧对ERK的蛋白表达没有明显影响，但是可以增加P-ERK的蛋白表达；P42/P44MAPK途径抑制剂对ERK蛋白表达没有明显影响，对于P-ERK具有抑制作用，并具有浓度依赖性。 结论：(1)P42/P44MAPK途径与缺氧时RPE细胞增殖有关。 (2)P42/P44MAPK途径与细胞周期蛋白D的生成有关，并可通过抑制P42/P44MAPK途径减少细胞周期蛋白D的生成。 (3)P42/P44MAPK途径的阻断可以使RPE细胞一定程度上停留在G1期从而抑制细胞的有丝分裂。 (4)P42/P44MAPK途径抑制剂通过对P-ERK的抑制影响RPE细胞的增殖。

目录

前言

材料与方法

结果

分析和讨论

小结

参考文献

致谢

Ras/Raf/ERK信号传导通路与VEGF的联系

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