5-氮杂脱氧胞苷对子宫内膜癌细胞的生长及RASSF1A基因表达的影响

摘要

目的探讨DNA甲基转移酶抑制剂——5-氮杂脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对子宫内膜癌细胞的生长及RASSF1 A基因表达的影响。方法5-Aza-CdR作用后,采用锥虫蓝染色法、流式细胞仪分别检测子宫内膜癌细胞株HEC-1 B细胞的生长及凋亡情况,采用RT-PCR技术、甲基化特异性PCR（MSP）技术分别检测HEC-1 B细胞中RASSF1A mRNA的表达和RASSF1 A基因启动子的甲基化状态。结果（1） HEC-1 B细胞的生长及凋亡情况:5-Aza-CdR对HEC-1 B细胞生长的抑制作用呈明显的剂量和时间依赖性（P＜0.01）;且HEC-1 B细胞的凋亡率也呈明显的剂量依赖性（P＜0.01）。 （2）HEC-1 B细胞中RASSF1 A mRNA的表达:未经5-Aza-CdR作用的HEC-1 B细胞中RASSF1A mRNA表达缺失;不同浓度5-Aza-CdR（分别为0.05、0.1、1、5、10 nmol/ml）作用后,HEC-1 B细胞中RASSF1 AmRNA表达不同程度地上升,其相对表达水平分别为0.074±0.004、0.105±0.004、0.167±0.006、0.334 ±0.005、0.484 ± 0.007,分别与未经5-Aza-CdR作用的细胞（为0）比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）。 （3）HEC-1B细胞中RASSF1 A基因启动子的甲基化状态:未经5-Aza-CdR作用的HEC-lB细胞中RASSF1 A基因启动子呈高甲基化状态;加入低浓度（即0.05、0.1、1、5 nmol/ml）的5-Aza-CdR后,HEC-1 B细胞中RASSF1A基因启动子的甲基化水平下降,呈半甲基化状态（即同时出现甲基化和非甲基化条带）;当5-Aza-CdR浓度为10 nmol/ml时,HEC-1 B细胞中RASSF1 A基因启动子呈非甲基化状态。结论（1）5-Aza-CdR可抑制HEC-1 B细胞增殖、促进HEC-1 B细胞凋亡。（2） 5-Aza-CdR能使HEC-1 B细胞重新表达RASSF1 A mRNA,能逆转RASSF1A基因启动子的高甲基化状态。