含笑内酯对卵巢上皮性癌细胞的作用及其机制

摘要

目的探讨含笑内酯对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞的作用及其可能的机制。方法 （1）不同浓度（分别为0.25、0.5、1、2.5、5、10、20、50 μmol/L）含笑内酯作用卵巢癌细胞系HeyA8、SKOV3细胞及卵巢癌顺铂耐药细胞系A2780/DDP细胞72 h后, 四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测3种卵巢癌细胞的生长情况, 选择抑制作用最为显著的卵巢癌细胞（即HeyA8细胞）用于后续实验。（2）不同浓度（分别为5、10、20 μmol/L）含笑内酯作用24 h后, 流式细胞仪检测HeyA8细胞的凋亡情况, 实时荧光定量PCR技术检测HeyA8细胞中RelA mRNA的表达, 蛋白印迹（western blot）法检测HeyA8细胞中核因子κB（NF-κB）信号通路相关蛋白RelA和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9（caspase-9）的表达。结果 （1）不同浓度含笑内酯作用72 h后, HeyA8、SKOV3及A2780/DDP细胞的生长均受到明显抑制, 且均呈显著的浓度依赖性（P＆0.05）;其50%抑制浓度（IC50）分别为（9.8±2.2）、（12.0±2.1）、（12.8±1.8）μmol/L。选用抑制效果最佳的HeyA8细胞进行后续实验。（2）不同浓度含笑内酯作用24 h后, 随着含笑内酯浓度的增高, HeyA8细胞的细胞凋亡比例增高, 细胞存活比例下降, 细胞中RelA mRNA的表达水平下降, 当含笑内酯浓度为20 μmol/L时, 上述指标分别与其对照（仅加入溶剂者）比较, 差异均有统计学意义（P＆0.01）;HeyA8细胞中RelA蛋白的表达强度逐渐减弱, 而活化caspase-9蛋白的表达强度逐渐增强。结论含笑内酯对卵巢癌HeyA8、SKOV3及A2780/DDP细胞均有显著的抑制作用, 且对HeyA8细胞的抑制作用最明显;其作用机制可能是通过抑制NF-кB信号通路、诱导活化caspase-9蛋白的表达来促进卵巢癌HeyA8细胞的凋亡。