伊尼奥小单孢菌2-脱氧蟹肌醇胺脱氢酶基因sisP的克隆与表达

摘要

目的:克隆西索米星生物合成基因--2-脱氧蟹肌胺(DOIA)脱氢酶基因.方法:以庆大霉素生物合成基因簇(AY524043)中的DOIA脱氢酶基因gntP作为参考模板设计引物,从伊尼奥小单孢菌(Micromonospora inyoensis)中,通过PCR方法扩增参与西索米星生物合成的DOIA脱氢酶基因,经测序鉴定、序列分析,并通过表达载体对该基因进行异源表达.结果:PCR扩增到一条长约1 035 bp的条带,包含一个开放阅读框长1 023 bp,推测其编码含340个氨基酸残基的蛋白质(相对分子质量约36×103),与已报道的DOIA脱氢酶同源性很高,该基因在IPTG诱导下,在大肠杆菌E.coli BL21 (DE3)实现过量表达,表达产物的相对分子质量与预测值一致.结论:通过PCR技术从伊尼奥小单孢菌中克隆到参与西索米星生物合成基因--DOIA脱氢酶基因,命名为sisP,GenBank登录号为EU200975.