人胃癌组织定向cDNA文库的构建

摘要

目的快速构建成人胃癌组织cDNA文库.方法从人胃癌组织分离总RNA,以含有Sfi IB酶切位点的oligo(dT)引物合成第1链cDNA,以含Sfi IA酶切位点的SMART寡核苷酸为引物经LD-PCR扩增双链cDNA,双链cDNA经Sfi I(IA & IB)酶切,以CHROMA SPIN+TE-1000柱分级分离cDNA,收集符合需要的cDNA片段并纯化,随后将之与λTripIEx2载体连接经体外包装成噬菌体cDNA文库.结果经检测共获得2.73×106个重组子,重组率约为94%,插入片段大小平均为1.2 kb.结论用SMART方法构建的胃癌组织cDNA文库质量较高,为以后筛选胃癌相关基因奠定了基础.