TH基因修饰细胞脑内移植治疗猴帕金森病的实验研究

摘要

目的评价包囊化酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroylase, TH)基因修饰的基因工程细胞脑内移植治疗帕金森病的疗效.方法将pcDNA3/hTH质粒转染人神经母细胞瘤细胞系SY5Y细胞,筛选出阳性克隆,微包囊化处理后的含有TH基因修饰细胞植入PD猴模型脑内,观察其行为、CSF中DA含量的变化,用免疫组化法检查移植细胞的存活情况.结果 (1)pcDNA3/hTH基因经亚克隆,提取纯化的质粒,经ECORI酶切后产生1.9Kb和5.5Kb的片段.转基因后的SY5Y细胞免疫细胞化学染色显示TH染色强阳性;(2)移植后PD猴症状明显改善,脑脊液中DA合量升高;(3)SABC免疫组化发现移植区存在大量TH阳/性细胞.结论构建的TH基因工程细胞体外和体内均表达人类TH基因;微包囊化处理后的基因工程细胞在PD猴脑内存活并发挥治疗作用.