反义miR-21抑制U251人脑胶质瘤细胞株增殖的体外研究

摘要

目的探讨敲低miR-21表达抑制U251人脑胶质瘤细胞株增殖能力的效果和机制。方法脂质体介导转染反义寡聚核苷酸（AS-miR-21）下调U251人脑胶质瘤细胞株miR-21的表达。使用实时定量PCR和原位杂交法鉴定转染后U251细胞miR-21表达水平下调;MTT法评价AS-miR-21抑制U251细胞生长效果;流式细胞术检测转染后U251细胞周期分布和凋亡;采用细胞免疫荧光技术（PCNA、CyclinD1、Bcl-2、PrTEN和Septin-7）评价转染后U251细胞肿瘤生物学性状改变。结果 MTT结果显示AS-miR-21转染组肿瘤细胞生长速度小于对照组与无义寡核苷酸（F=78.926,P=0.000）组;实时定量PCR法:AS-miR-21转染组miR-21表达下调为对照组0.042±0.012;LNA-miR-21原位杂交显示AS-miR-21转染组miR-21表达水平较对照组与无义寡核苷酸组下调;流式细胞术检测可见AS-miR-21转染组细胞周期存在G0/G1期阻滞（χ~2=14.160,P=0.007）且凋亡比例高于对照组与无义寡核苷酸组（F=23341.25,P=0.000）;细胞免疫荧光法表明AS-miR-21治疗后U251细胞PCNA、CyclinD1、Bcl-2表达下调,PTEN、Septin-7表达上调。结论以miR-21作为靶点抑制U251人脑胶质瘤细胞株生长结果肯定,miR-21可以作为人脑胶质瘤基因治疗的侯选靶点。