CUL4B低表达抑制神经胶质母细胞瘤增生的实验研究

摘要

目的通过抑制Cullin 4B（简称为CUL4B）在神经胶质母细胞瘤U87和U251细胞中的表达,探讨CUL4B在神经胶质母细胞瘤形成中的作用及其机制。方法体外实验设立3组,分别为空白对照组、Lv-shCon组以及Lv-shCUL4B组;体内实验设立2组,分别为Lv-shCon组和LvshCUL4B组。采用CUL4B siRNA构建慢病毒并感染U87和U251细胞株,以下调细胞中CUL4B的表达。通过实时定量PCR（qPCR）和Western blot方法检测各组细胞中CUL4B的表达。以MTT法和细胞集落形成实验分别检测细胞增殖能力和集落形成能力。通过Transwell实验检测细胞的迁移能力。采用流式细胞术进行细胞周期分析。以Western blot方法检测细胞周期和细胞迁移的相关调控因子的表达。建立U87和U251细胞移植瘤裸鼠模型,观察各组动物的瘤体生长情况。结果 qPCR和Western blot结果表明,与空白对照组和Lv-shCon组相比,Lv-shCULAB组U87细胞和U251细胞的CUL4B表达均下降（均P＜0.01）。MTT实验表明,与空白对照组相比,Lv-shCUL4B组的生长均明显受到抑制,U87细胞的增殖能力降低了63.7%,U251细胞降低了45.5%（均P＜0.01）。与空白对照组和Lv-shCon组相比,Lv-shCUL4B组U87和U251细胞集落均数均减少（均P＜0.01）。Transwell实验结果显示,U87和U251细胞Lv-shCUL4B组发生迁移的能力均低于空白对照组和Lv-shCon组（均P＜0.01）。流式细胞仪检测结果显示,与空白对照组及Lv-shCon组相比,U87和U251细胞Lv-shCUL4B组处于G1期的比例上升,处于S期的比例下降。与空白对照组和Lv-shCon组相比,U87和U251细胞Lv-shCUl4B组Cyclin D1和MMP-9的表达水平下降（均P＜0.01）,p16（INK4A）和盯EN的表达水平升高（均P＜0.01）。体内实验结果表明,与Lv-shCon组相比,Lv-shCUL4B组U87细胞种植裸鼠的肿瘤重量下降57.7%,U251细胞种植裸鼠的肿瘤重量下降75.4%（均P＜0.01）。结论 CUL4B低表达可抑制神经胶质母细胞瘤的增生,敲除CUL4B有可能成为靶向治疗神经胶质母细胞瘤的一种新方法 。