敲低miR221/222上调PUMA促进胶质母细胞瘤U251细胞凋亡的体内研究

摘要

目的探讨敲低miR-221/222表达上调PUMA对U251人脑胶质母细胞瘤凋亡的影响及其机制。方法 5周龄BALB/c裸鼠左侧鼷部皮下接种1mm~3移植胶质瘤瘤块建立裸鼠移植瘤模型,1周后接受治疗（转染无义序列组、反义miR-221/222共转染组分别瘤内注射无义对照序列、反义miR-221/222寡核苷酸,对照组注射等量溶剂,每组8只）。治疗开始至28 d观察肿瘤的生长情况,观察期结束时取肿瘤组织HE染色检测病理学改变;荧光原位杂交（FISH）、实时定量PCR检测肿瘤组织miR-221、miR-222的表达;TUNEL染色检测肿瘤细胞凋亡,免疫组化染色、Westernblotting检测肿瘤组织凋亡相关蛋白PUMA、bax和bcl-2、p53的表达。结果治疗后6～28d反义miR-221/222共转染组移植瘤的体积明显低于对照组和转染无义序列组,差异有统计学意义（P＜0.05）;与转染无义序列组及对照组比较,反义miR-221/222共转染组肿瘤组织miR-221、miR-222mRNA的表达水平下降;HE染色显示反义miR-221/222共转染组肿瘤组织异型性减低,新生血管数减少;与对照组和转染无义序列组比较,反义miR-221/222共转染组肿瘤组织的凋亡指数较高,差异有统计学意义（P＜0.05）;免疫组化染色检测显示与对照组和转染无义序列组比较,反义miR-221/222共转染组PUMA、bax表达阳性率较高,bcl-2表达阳性率较低,差异有统计学意义（P＜0.05）;Western blotting检测显示与对照组和转染无义序列组比较,反义miR-221/222共转染组肿瘤组织PUMA和bax蛋白表达升高,bcl-2表达下降,而p53表达无明显变化。结论反义miR-221/222治疗可通过上调PUMA蛋白表达来诱导U251胶质瘤细胞凋亡。