AP-1蛋白c-Jun与Fra1形成二聚体促进类多巴能神经细胞SH-SY5Y存活

摘要

目的探讨激活蛋白-1（AP-1）c-Jun与Fra1对类多巴胺能神经细胞存活能力的影响。方法 （1）体外培养SH-SY5Y细胞,裂解后进行免疫共沉淀实验,检测c-Jun是否与Fra1形成二聚体。（2）将细胞分为4组,分别为对照组[加入二甲基亚砜（DMSO）]、SP600125组、U0126组及SP600125+U0126组[分别加入c-Jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂SP600125、MEK1/2抑制剂U0126及SP600125+U0126]。免疫印迹法检测c-Jun或Fra1表达,MTT法检测细胞活力。（3）用滴度为100MOI腺病毒（Ad）感染细胞,共分为4组,分别为对照组（转染绿色荧光蛋白）、Ad-c-Jun组、Ad-Fra1组、Ad-c-Jun+Ad-Fra1组（后3组分别转染相应Ad）,免疫荧光染色检测感染率,MTT法检测细胞活力。结果 （1）免疫共沉淀结果显示c-Jun和Fra1形成二聚体。（2）免疫印迹结果显示SP600125组c-Jun表达减少,U0126组Fra1表达减少。MTT结果显示,4组细胞活力差异有统计学意义（F=16.647,P=0.000）,其中对照组与SP600125组、U0126组及SP600125+U0126组差异有统计学意义（P＜0.05）。（3）过表达c-Jun、Fra1后,4组细胞活力差异有统计学意义（F=14.543,P=0.000）,其中对照组与Ad-c-Jun组差异无统计学意义（P＞0.05）,对照组与Ad-Fra1组差异有统计学意义（P＜0.05）,Ad-Fra1组与Ad-c-Jun+Ad-Fra1组差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 c-Jun与Fra1形成二聚体促进类多巴胺能神经细胞存活。