血管生成素1通过调节Eps8的表达增强大鼠血-脊髓屏障功能

摘要

目的探讨表皮生长因子受体底物蛋白8（Eps8）在血管生成素1（Ang1）增强大鼠血-脊髓屏障功能过程中发挥的重要作用。方法分离、培养大鼠脊髓微血管内皮细胞（SCMEC）,建立体外血-脊髓屏障模型。（1）SCMEC给予Ang1处理后于不同时间点（0 h、4 h、8 h、12 h）测定跨内皮电阻（TEER）值,Westernblotting检测Eps8蛋白的表达水平,以未用Ang1处理者为对照。（2）将SCMEC分为对照siRNA组、对照siRNA+Ang1组、Eps8 siRNA组及Eps8 siRNA+Ang1组,分别给予siRNA干扰Eps8表达及Ang1处理。Western blotting检测Eps8蛋白的表达水平并测定TEER值,荧光分光光度计测定荧光素钠（Na-F）、伊凡斯兰（EBA）的通透率,纤维型肌动蛋白（F-actin）荧光染色观察细胞骨架变化。结果（1）Ang1处理后4h、8h、12h SCMEC的TEER值和Eps8蛋白的表达水平较对照组有显著升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。（2）Eps8 siRNA组SCMEC Eps8的表达水平较对照siRNA组降低约75%,差异具有统计学意义（P＜0.05）;而Eps8 siRNA+Ang1组较Eps8 siRNA组Eps8的表达水平无明显改变。Eps8 siRNA组不同时间点TEER值较对照siRNA组显著降低,对Na-F及EBA的通透率较对照siRNA组均有明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）;而Eps8 siRNA+Ang1组与Eps8 siRNA组相比,TEER值及对Na-F和EBA的通透率无明显改变。对照siRNA+Ang1组SCMEC经Ang1处理4 h后,F-actin在细胞-细胞连接处的分布明显增强,而Eps8 siRNA+Ang1组则无此改变。结论Ang1可通过影响Eps8在SCMEC的表达调节F-actin在血-脊髓屏障的分布,进而影响大鼠血-脊髓屏障功能。