Rac1影响下皮层肌动蛋白对U251胶质瘤细胞迁移和侵袭的调节

摘要

目的探讨皮层肌动蛋白对胶质瘤细胞迁移、侵袭的影响及Rac1在此过程中的作用。方法体外常规培养人胶质瘤U251细胞,免疫荧光染色检测细胞中皮层肌动蛋白与Rac1的表达和分布;将U251细胞分为siRNA干扰组、阴性对照组、空白对照组、siRNA干扰+Rac1抑制剂组,分别转染皮层肌动蛋白siRNA序列、阴性对照序列、等量Lipofetmiane 2000及皮层肌动蛋白siRNA序列+Rac1抑制剂。48 h后采用Western blotting检测4组细胞皮层肌动蛋白、Rac1蛋白的表达;细胞划痕实验、Transwell细胞侵袭实验分别检测细胞的迁移、侵袭能力;免疫荧光染色检测细胞片状伪足的形成。结果免疫荧光染色检测显示U251细胞中皮层肌动蛋白与Rac1在肌动蛋白聚合位点共定位;Western blotting检测显示与阴性对照组、空白对照组比较,siRNA干扰组、siRNA干扰+Rac1抑制剂组细胞皮层肌动蛋白、Rac1蛋白的表达降低,且siRNA干扰+Rac1抑制剂组细胞皮层肌动蛋白、Rac1蛋白的表达低于siRNA干扰组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;划痕实验和细胞侵袭实验显示与空白对照组与阴性对照组比较,siRNA干扰组、siRNA干扰+Rac1抑制剂组创面愈合率、穿膜细胞数减少,且siRNA干扰+Rac1抑制剂组创面愈合率、穿膜细胞数低于siRNA干扰组,差异有统计学意义（P＜0.05）;免疫荧光染色检测显示siRNA干扰组、siRNA干扰+Rac1抑制剂组细胞的片状伪足较空白对照组与阴性对照组减小,且siRNA干扰+Rac1抑制剂组细胞的片状伪足较siRNA干扰组进一步减小。结论Rac1可能通过调节皮层肌动蛋白进而影响细胞片状伪足的大小来促进胶质瘤细胞的迁移和侵袭。联合抑制Rac1和皮层肌动蛋白可能是治疗神经胶质瘤的有效手段。