肌萎缩侧索硬化患者血清对器官型培养脊髓片的影响

摘要

目的观察肌萎缩侧索硬化(ALS)患者的血清对器官型培养的脊髓片的影响,探讨ALS运动神经元损伤的机制.方法取120只生后8 d乳鼠的腰段脊髓切片240片做器官型培养,在培养液中分别加入健康对照血清(对照组120片)和含有较高浓度谷氨酸(Glu)的ALS患者血清(ALS组120片),培养4周,计数脊髓前角α运动神经元和后角中间神经元的数目,琥珀酸脱氢酶(SDH)染色观察线粒体酶活性改变,测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、Glu、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量,两组间进行比较.结果对照组脊髓片在体外生长良好,α运动神经元(约15个/张脊髓片)和后角中间神经元(约40个/2.5mm2)的数目稳定.而ALS组的脊髓片在培养4周时前角α运动神经元的数目明显减少(约7个/张脊髓片),SDH染色明显减弱.用ALS患者血清干预后,培养液中LDH、MDA的含量在培养3周后较对照组分别升高了22.4%和48.2%,而SOD则下降了12.6%;ALS组培养液中的Glu含量在各时点均较对照组显著升高(P＜0.01).结论 Glu兴奋毒、自由基损伤在ALS的发病中起重要作用,脊髓的器官型培养技术为ALS损伤机制的探讨提供了有效手段.