TMEM230-A110T突变体对多巴胺能神经细胞自噬、增殖及凋亡的影响

摘要

目的探讨跨膜蛋白230(TMEM230)的突变体TMEM230-A110T对多巴胺能(DA)神经细胞增殖、凋亡和自噬的影响。方法采用全反式维甲酸(RA)/脑源性神经营养因子(BDNF)序贯分化法构建DA能神经细胞模型,并随机分为WT组(野生型对照组)、MUT组(转染TMEM230-A110T突变体载体)、SP600125组(给予JNK通路抑制剂SP600125处理)、SB203580组(给予p38 MAPK通路抑制剂SB203580处理)、si-Beclin-1组(转染si-Becline-1)和SP600125+pcDNA-Beclin-1组(给予SP600125干预+转染pcDNA-Beclin-1)组(n=3)。采用Western blotting检测各组细胞TMEM230、JNK/p38MAPK/Beclin-1途径、凋亡和自噬相关蛋白的表达。采用CCK-8和Annexin V-FITC/PI试剂盒分别检测细胞模型的增殖和凋亡。采用透射电镜观察细胞模型中的自噬小体。GFP-LC3试剂盒监测细胞模型中的LC3斑点。结果成功构建DA能神经细胞模型。转染TMEM230-A110T突变体显著降低DA能神经细胞增殖,并增加其凋亡和自噬水平(P<0.05)。TMEM230-A110T突变体能够激活JNK/p38 MAPK通路并上调Beclin-1的表达(P<0.05)。阻断JNK/p38 MAPK/Beclin-1途径显著增加DA能神经细胞增殖,并下调凋亡和自噬水平,而过表达Beclin-1能够逆转这个过程(P<0.05)。结论TMEM230-A110T突变体可通过激活JNK/p38 MAPK/Beclin-1途径促进DA能神经细胞自噬,从而抑制其增殖并诱导其凋亡。