人淀粉样前体蛋白基因与绿色荧光蛋白融合基因筛选系统的建立

摘要

目的构建携带人淀粉样前体蛋白(APP)的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)载体,以利于初步筛选对APPmRNA水平作用的药物.方法将pEGFP质粒和携带野生型APP695亚型的pXCJL经HindⅢ酶切,连接,PCR初筛,酶切鉴定,进一步经测序证实.携带野生型人类APP751亚型cDNA的pCDNA3.1质粒用XbaⅠ酶切,Klenow酶填平,再用HindⅢ酶切,回收APP751片段;质粒EGFP用Sma Ⅰ和HindⅢ酶切,将目的基因APP751片段与EGFP载体片段连接生成重组质粒,酶切鉴定,测序证实.构建好的重组质粒转染COS7细胞,观察EGFP的表达情况.结果APP695和APP751重组质粒上的EGFP在COS-7细胞内得以表达.结论构建的APP-EGFP融合基因重组质粒,有助于方便、快速地初筛出作用于APP mRNA水平的药物.