吡非尼酮对IgA肾病患者血清IgA1诱导人肾小球系膜细胞增殖的影响

摘要

目的探讨吡非尼酮（pirfenidone, PFD）对IgA肾病（IgA nephropathy, IgAN）患者血清IgA1诱导人肾小球系膜细胞（HMC）增殖的作用及其可能机制。方法采用Jacalin亲和层析联合Sephacryl S-200凝胶过滤法纯化IgAN患者血清IgA1并将单体热聚合为聚合IgA1（aIgA1）。CCK8法摸索PFD作用浓度及时间, 分为空白对照组、IgA1（0.5 mg/ml）组、IgA1（0.5 mg/ml）+PFD（2 mmol/L）组。采用CCK8法检测各组系膜细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期变化, 并计算系膜细胞增殖指数;Western印迹法检测转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad4、Smad7、纤维连接蛋白、Ⅳ型胶原蛋白（collagen Ⅳ）的蛋白表达水平;实时定量PCR检测各组TGF-β1、Smad4、Smad7、纤维连接蛋白、collagen Ⅳ的mRNA表达水平。结果与空白对照组相比, aIgA1诱导的HMC增殖显著增加（P＆0.05）;PFD处理后, HMC增殖活力显著被抑制（P＆0.01）;与空白对照组相比, IgA1组HMC中G1期细胞明显减少、S期细胞明显增多, 细胞增殖指数增加（均P＆0.05）;与IgA1组相比, IgA1+PFD组HMC中G1期细胞明显增多、S期及G2/M期细胞明显减少, 细胞增殖指数下降（均P＆0.05）。与空白对照组相比, aIgA1刺激下HMC中collagen Ⅳ、纤维连接蛋白、Smad4蛋白及mRNA表达均明显增加, TGF-β1蛋白表达增加, Smad7蛋白表达下降（均P＆0.05）;PFD处理后, HMC中collagen Ⅳ、纤维连接蛋白、Smad4蛋白及mRNA表达均明显下降, TGF-β1蛋白表达下调, Smad7蛋白表达上调（均P＆0.05）;各组TGF-β1和Smad7 mRNA表达在PFD处理前后差异均无统计学意义（均P＆0.05）。结论 PFD可增加HMC在G1期的阻滞, 抑制IgAN患者aIgA1诱导的HMC增殖, 减少细胞外基质的产生, 其机制可能与Smad7表达上调及TGF-β1/Smad4通路下调有关。